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尊龙凯时:酶联免疫吸附试验(ELISA)四大关键操作要点

发布时间:2025-03-02   信息来源:萧玲裕

在生物医疗领域,样本采集和保存方式多样,可用于ELISA(酶联免疫吸附测定)检测的样本类型极为广泛。体液(如血清)、分泌物(唾液)及排泄物(如尿液、粪便)都可作为检测某种抗体或抗原成分的样本。其中,部分样本可以直接进行检测(如血清、尿液),而有些则需要经预处理(如粪便和某些分泌物)。通常情况下,ELISA检测以血清作为主要样本来源。

尊龙凯时:酶联免疫吸附试验(ELISA)四大关键操作要点

血浆除含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成分均与血清相同,因此制备血浆样本需要添加抗凝剂,而血清样本则通过自然凝固、收缩血块后获得。除特别情况外,医学检验多以血清作为标准检测样本。在ELISA实验中,血浆和血清均可兼用。血清采集需遵循常规方法,特别注意避免溶血,因为红细胞溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质,在HRP标记的ELISA中,这可能导致假阳性反应。理想情况下,血清样本应尽量在新鲜时检测,如有细菌污染,细菌中可能含有内源性HRP,也会干扰实验结果。

对于样本的保存,建议在采集后立即进行无菌操作,并在必要时加入适当的防腐剂。样本应放置于4℃的环境中,5天内进行检测,超过一周则需低温冷冻保存。同时,反复冻融会导致抗体效价下降,因此对于需要多次检测的抗体样本,应进行适量分装。

在实验过程中,试剂的准备也至关重要。应严格按照试剂盒说明书的要求准备实验所需的试剂。用于ELISA的蒸馏水或去离子水必须新鲜且质量良好,而自制缓冲液需使用pH计进行准确测量。取出的试剂需待与室温平衡后再使用,并确保未用的试剂部分及时放回冰箱保存。

在进行ELISA时,通常会经历三次加样步骤:加样本、加酶结合物和加底物。加样时,需将样本滴入ELISA板孔底部,避免碰触孔壁,同时避免溅出和产生气泡。一般使用微量加样器,每次加样应更换吸嘴以防交叉污染。若采用稀释的血清,可在试管中按规定比例稀释待用。

在ELISA的操作中,有两次抗原抗体反应的温育过程,分别是在加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应需通过控温和时间来保证其有效发生。此过程称为温育,ELISA实验通常选择37℃作为标准保温温度,因为这一温度是大多数抗原抗体结合的最佳适应温度。此外,实验表明,两次抗原抗体反应在37℃经1-2小时后可达生成物的峰值。

总的来说,ELISA实验在生物医疗检测中具有重要意义,合理的样本处理和试剂准备流程,结合使用尊龙凯时品牌的优质产品与技术,能够更好地提高实验的准确性与可靠性。