尊龙凯时的人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45培养说明书包含以下几个部分，以帮助您更好地进行细胞培养。

一、细胞培养条件

- **细胞名称**：人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45
- **生长特性**：悬浮生长
- **冻存条件**：无血清冻存液（货号：C7001）
- **培养体系**：1640(含NAHCO3 15g/L) + 10% FBS + 1% P
- **传代方法**：首次建议1:2传代，建议每两天更换培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好时，使用完全培养液灌满并密封培养瓶，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，请用75%酒精对整个培养瓶进行消毒，并在超净台内严格无菌操作。然后将细胞瓶置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，让细胞状态稳定，之后再进行处理。使用显微镜观察细胞的生长情况，并保存不同倍数的照片记录（建议至少拍摄40x、100x、200x的照片各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片的情况下默认收到状态良好。此外，建议传代时一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后务必松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

- 如果细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，留下5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2的培养箱中培养；
- 若细胞密度超过80%，可以进行传代，具体步骤如下：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞变化；
3. 当细胞大部分变圆并脱落时，迅速将瓶子取回敲打几下后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
4. 轻轻吹打细胞以确保其全部脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重悬细胞于1-2ml完全培养基中。
5. 按1:2比例进行分瓶传代，并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱养殖。

b、细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使之脱落。
3. 将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清。将沉淀细胞加入1ml冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱中，若后续要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后才能转入液氮罐。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，注意佩戴防护面具，迅速放入37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶为止，外壁用75%的酒精擦拭消毒；
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养；
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

一些细胞在运输过程中可能会发生脱落，这是正常现象。若脱落较多，可将培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，在沉淀中加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，再添加5ml完全培养基终止反应，之后再离心，弃上清并重悬于1-2ml新的完全培养基。最后，将细胞按1:2比例分瓶传代，并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后置于37℃、5% CO2的细胞培养箱内继续培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题时可重发的情况包括：
- 细胞在运输过程中丢失或瓶身破损；
- 收到后48小时内确认的细胞污染问题；
- 常温发货细胞静置24小时后或干冰发货细胞复苏24小时后大部分细胞未存活（需提供真实状态照片）；
- 干冰发货细胞复苏24小时后或常温发货的细胞静置4小时后未开封出现污染的情况。
- 细胞活性问题需在7天内反馈，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力后方可重发。
- 收到当天、第2和第3天需拍照，3天未告知则视为产品合格。若4-7天内出现问题需提供前3天照片以作参考。
- 判定为我方责任的由技术人员评估后重发。
2）不予重发的情况包括：
- 客户所引起的细胞污染；
- 客户不当操作导致细胞状态不佳；
- 非本库推荐的培养体系导致的细胞问题；
- 未提供细胞培养前三天照片而导致的细胞状态问题；
- 对细胞进行其他形式处理；
- 收到细胞后2天内未予以反馈；
- 其他情况按具体情况而定。

通过遵循以上指南，您将能够有效地培养和管理尊龙凯时人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45，确保细胞的健康生长和稳定性。