近期,华大智造对其DNBSEQ平台的甲基化建库与测序技术进行了全面升级,推出了新一代全基因组甲基化文库制备试剂盒V30(MGIEasy Whole Genome Methylation Sequencing Library Prep Kit V30,简称WGMSV30)。该试剂盒是基于双链接头方法,利用物理打断手段对DNA片段进行建库,并采用酶法技术将非甲基化的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U),结合DNBSEQ平台,能够以单碱基精度解析DNA的甲基化状态,从而构建精细的全基因组甲基化图谱。
WGMSV30将为广泛的领域提供高效、准确的全基因组甲基化建库方案,包括大规模人群的表观组研究、表观遗传科研、动植物研究、疾病甲基化标志物筛选及药物研发等。目前,该试剂盒已适配MGISEQ-2000平台,利用该平台的升级算法,无需添加平衡文库即可实现纯甲基化文库的测序。同时,华大智造的研发团队正针对WGMSV30的DNBSEQ-T7适配进行最终的稳定性测试,更多的实测数据将会持续分享,尽请期待。
通过使用不同批次的WGMSV30构建NA12878标准品的DNA甲基化文库,在不加平衡文库的情况下,平行载入MGISEQ-2000ECR70(搭配SM测序试剂)和ECR71(搭配SM20测序试剂)进行PE150测序,单lane的reads产出基本稳定在400M左右,每个文库可获得约120G的原始数据,实现了“1库1lane”的目标,且测序质量表现优秀。其中,SM测序试剂的Q30稳定在89%左右,而SM20测序试剂的Q30稳定在94%左右,Q40稳定在87%左右。
WGMSV30试剂盒采用酶法转化,损伤小,增大了文库插入片段的长度,从而更好地支持PE150测序。不同批次建库试剂盒构建的NA12878标准品DNA甲基化文库的插入片段主峰约280bp,表现一致。此外,试剂盒在末端修复反应体系和步骤上进行了优化,有效降低了Reads末端的M-bias碱基个数。结合SM20版测序试剂和ECR71软件版本的结果,不同批次建库试剂盒构建的NA12878标准品DNA甲基化文库的M-bias表现稳定,Bottom Strand和Top Strand的Read1与Read2的甲基化率几乎重合。
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